Rôle de la phosphatase LYP (PTPN22) dans la production des formes réactives de l’oxygène par le polynucléaire neutrophile humain
GARDETTE Anaïs1,2,3,4, MARZAIOLI Viviana1,2,3, HURTADO-NEDELEC Margarita1,2,3,5, DIEUDE Philippe1,2,3,4, EL-BENNA Jamel1,2,3.
1-Inserm, U1149, CNRS-ERL8252, Centre de Recherche sur l’Inflammation, Paris, France. 2-Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Laboratoire d’Excellence Inflamex, Faculté de Médecine, Site Xavier Bichat, Paris, France. 3-DHU Fire, CHU. Xavier Bichat, Paris, France. 4-Service de Rhumatologie, Hôpital Bichat, APHP, Paris, France. 5-Service d’Hématologie et Immunologie, Hôpital Bichat, APHP, Paris, France.
(anais.gardette@bch.aphp.fr)
Introduction
La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie plurifactorielle relevant de facteurs environnementaux, génétiques et immunologiques. PTPN22 est le deuxième facteur génétique de susceptibilité après HLA-DRB1 dans la PR et code pour une tyrosine phosphatase appelée LYP. Son rôle dans les lymphocytes T et B a déjà été montré dans plusieurs études. Cependant, son rôle dans l’activation des polynucléaires neutrophiles (PN) est peu étudié. Le but de cette recherche est d’étudier le rôle de LYP dans le PN humain, et en particulier dans l’activation de la NADPH oxydase NOX2.
Méthodes
Les PN ont été isolés à partir de sang total de donneurs sains. L’expression de l’ARNm de LYP a été étudiée par RT-PCR quantitative. L’expression et la localisation de la protéine LYP ont été étudiées par Western Blot et microscopie confocale. L’utilisation d’inhibiteurs spécifiques de LYP a permis l’étude de son rôle. La production des formes réactives de l’oxygène (FRO/ROS) a été analysée par chimioluminescence et de l’anion superoxyde (O2°-) par spectrophotométrie. La dégranulation des PN a été mesurée par cytométrie en flux. La phosphorylation des MAPKinases et de la p47phox a été analysée par Western Blot.
Résultats
Nos résultats montrent que LYP est exprimée dans les PN humains au repos. L’incubation avec le TNFα augmente l’expression de LYP et entraîne sa translocation à la membrane. L’expression de LYP est augmentée dans les PN circulants de patients atteints de PR. Deux inhibiteurs de LYP inhibent la production des FRO et de l’O2°- dans les PN humains stimulés par le fMLP seul et lorsqu’ils sont primés par le TNFα. Les inhibiteurs de LYP inhibent également la phosphorylation de ERK1/2 après stimulation par le TNFα, et la phosphorylation de la p47phox induite par le fMLP.
Conclusion
La tyrosine phosphatase LYP aurait un rôle activateur de la NADPH oxydase dans les PN humains. LYP serait impliquée dans l’activation des ERK1/2 et la phosphorylation de la p47phox. Les inhibiteurs de LYP pourraient avoir des effets anti-inflammatoires dans la PR.